ПЦР анализ: что это такое?

Какие есть подводные камни при проведении оценки профрисков?

Первый соблазн, который одолевает любого работодателя, это не проводить оценку профессиональных рисков. Ну в самом деле, специальную оценку условий труда же мы провели. И здесь кроется опасность, ведь инспекторы ГИТ так не считают. Да и реестр опасностей в процедуре оценки профессиональных рисков несколько другой.

Безусловно, материалы СОУТ будут полезны при оценке профессиональных рисков, но полностью их не заменят.

Второй момент, на котором может «споткнуться» руководитель, — подготовить неполный комплекта документов. Специально для того, чтобы максимально подстраховаться и дать Вам наиболее полную информацию, мы проанализировали все предписания инспекторов разным организациям, когда либо попадавшие нам в руки. В итоге у нас получилась наиболее полная информационная картина. Если Вам интересно, список документов, требующихся для проведения оценки профессиональных рисков, приведён здесь. Изучайте и будьте внимательны.

Преимущества метода

Диагностика ПЦР обладает рядом преимуществ:

1. Высокая чувствительность. Даже при наличии всего нескольких молекул ДНК микроорганизма анализ ПЦР определяет наличие инфекции. Поможет метод при хронических и латентно протекающих заболеваниях. Часто в таких случаях микроорганизм является некультивируемым иными способами.
2. Для исследования подходит любой материал, например слюна, кровь, половые выделения, волосы, клетки эпителия. Наиболее распространенным является анализ крови и урогенитального мазка на ПЦР.
3. Не требуется длительного выращивания культур. Автоматизированный процесс проведения диагностики позволяет получить результаты исследования спустя 4-5 часов.
4. Метод является практически стопроцентно достоверным. Зафиксированы лишь единичные случаи ложноотрицательного результата.
5. Возможность определить несколько видов возбудителей из одной пробы материала. Это не только ускоряет процесс диагностики заболевания, но и существенно снижает материальные затраты. Часто врач назначает комплексный анализ ПЦР. Цена обследования, состоящего из определения шести возбудителей, составляет около 1500 рублей.

ПЦР для диагностики ВИЧ

В связи с тем, что метод полимеразной цепной реакции очень чувствителен к изменениям в организме и условиям проведения диагностики, многие факторы могут повлиять на результат. Поэтому анализ ПЦР на ВИЧ-инфекцию не является достоверным методом, его эффективность — 96–98 %. В остальных 2-4 % случаев тест дает ложноположительные результаты.

Но в некоторых ситуациях без ПЦР-диагностики ВИЧ не обойтись. Обычно ее проводят людям с ложноотрицательным результатом ИФА. Такие показатели говорят о том, что у человека еще не выработались антитела к вирусу и их невозможно выявить без многократного увеличения количества. Именно этого можно достичь, проведя анализ крови ПЦР-методом.

Также необходима такая диагностика детям первого года жизни, рожденным от ВИЧ-позитивной матери. Метод является единственным способом достоверного определения статуса ребенка.

Когда можно получить результат после проведения теста на коронавирус

При исследовании по методу ПЦР ответ можно получить в течение нескольких часов, а если случай сложный, то на это уйдет два дня.

Сдать мазок анонимно не получится. Если результат положительный, придется сидеть на карантине или пройти стационарное лечение — решение будет принимать доктор по степени тяжести заболевания. Кроме этого, будут выявлены все контактные лица, и они также будут проверены на наличие коронавируса.

В случае, когда у контактных результат отрицательный, придется повторить тест через 4 дня, поскольку велика вероятность ошибки из-за слишком раннего забора анализов.

Медицинские офисы KDLmed

• КЛИНИКА 1
• КЛИНИКА 2
• КЛИНИКА 3

АДРЕС:г. Пятигорск, проспект 40 лет Октября, 62/3

ВРЕМЯ РАБОТЫ:пн-пт 7:30 — 18:00
сб 7:30 — 14:00 / вс 8:30 — 13:00
Взятие крови: пн-сб 7:30 — 12:00
вс 8:30 — 12:00
Взятие мазка: пн-пт 7:30 — 16:00
сб 7:30 — 13:30 / вс 8:30 — 12:00

ТЕЛЕФОН:(8793) 330-640
+7 (928) 225-26-74

АДРЕС:г. Пятигорск, проспект 40 лет Октября, 14

ВРЕМЯ РАБОТЫ:пн-пт 7:30 — 18:00
сб 7:30 — 14:00 / вс 8:30 — 13:00
Взятие крови: пн-сб 7:30 — 12:00
вс 8:30 — 12:00
Взятие мазка: пн-пт 7:30 — 16:00
сб 7:30 — 13:30 / вс 8:30 — 12:00

ТЕЛЕФОН:(8793) 327-327
+7 (938) 302-23-86

АДРЕС:г. Пятигорск, ул. Адмиральского, 6А

ВРЕМЯ РАБОТЫ:пн-пт 7:30 — 18:00
сб 7:30 — 14:00
Взятие крови: пн-сб 7:30 — 12:00
Взятие мазка: пн-пт 7:30 — 16:00
сб 7:30 — 13:30

ТЕЛЕФОН:(8793) 98-13-00
+7 (928) 363-81-28

АДРЕС:г. Ставрополь, ул. Ленина, 301

ВРЕМЯ РАБОТЫ:пн-пт 7:30 — 15:00
сб 7:30 — 14:00 / вс 8:30 — 13:00

ТЕЛЕФОН:(8652) 35-00-01
+7 (938) 316-82-52

• КЛИНИКА 1
• КЛИНИКА 2

АДРЕС:г. Невинномысск, ул. Гагарина, 19

ВРЕМЯ РАБОТЫ:пн-пт 7:30 — 16:00
сб 7:30 — 15:00
вс 8:30 — 14:00

ТЕЛЕФОН:(86554) 7-08-18
+7 (928) 303-82-18

АДРЕС:г.Невинномысск, ул. Гагарина, 60

ВРЕМЯ РАБОТЫ:пн-пт 7:30 — 16:00
сб 7:30 — 13:00

ТЕЛЕФОН:8 (86554) 6-08-81
8 (938) 347-42-17

АДРЕС:г. Нефтекумск, 1-й микрорайон, ул. Дзержинского, 7

ВРЕМЯ РАБОТЫ:пн-пт 7:30 — 18:00
сб 7:30 — 13:00

ТЕЛЕФОН:(86558) 4-43-83
+7 (928) 825-13-43

АДРЕС:г. Буденновск, пр. Энтузиастов, 11-Б

ВРЕМЯ РАБОТЫ:пн-пт 7:30 — 18:00
сб 7:30 — 13:00
вс 8:30 — 13:00

ТЕЛЕФОН:(86559) 5-55-95
+7 (938) 302-23-89

АДРЕС:г. Зеленокумск, ул. Гоголя, д.83

ВРЕМЯ РАБОТЫ:пн-пт 7:30 — 18:00
сб 7:30 — 13:00
вс 8:30 — 13:00

ТЕЛЕФОН:(86552) 6-62-14
+7 (938) 302-23-90

АДРЕС:г. Минеральные Воды, ул. Горская, 61, 13/14

ВРЕМЯ РАБОТЫ:пн-пт 7:30 — 16:00
сб 7:30 — 16:00 / вс 8:30 — 15:00

ТЕЛЕФОН:(87922) 6-59-29
+7 (938) 302-23-88

• КЛИНИКА 1
• КЛИНИКА 2

АДРЕС:г. Ессентуки, ул. Володарского, 32

ВРЕМЯ РАБОТЫ:пн-пт 7:30 — 16:00
сб 7:30 — 14:30 / вс 8:30 — 13:00

ТЕЛЕФОН:(87934) 6-62-22
+7 (938) 316-82-51

АДРЕС:г.Ессентуки, ул.Октябрьская 459 а

ВРЕМЯ РАБОТЫ:пн-пт 7:30 — 15:00
сб 7:30 — 14:30

ТЕЛЕФОН:(87934) 99-2-10
+7 (938) 300-75-28

АДРЕС:г. Георгиевск, ул. Ленина, 123/1

ВРЕМЯ РАБОТЫ:пн-пт 7:30 — 16:00
сб 7:30 — 14:00 / вс 8:30 — 13:00

ТЕЛЕФОН:(87951) 50-9-50
+7 (938) 302-23-87

АДРЕС:г. Благодарный, ул. Первомайская, 38

ВРЕМЯ РАБОТЫ:пн-пт 7:30 — 15:00
сб 7:30 — 13:00

ТЕЛЕФОН:(86549) 24-0-24
+7 (928) 363-81-37

АДРЕС:г. Светлоград, ул. Пушкина, 19 (Центр, Собор)

ВРЕМЯ РАБОТЫ:пн-пт 7:30 — 15:00
сб 7:30 — 13:00

ТЕЛЕФОН:(86547) 40-1-40
+7 (928) 363-81-41

АДРЕС:с. Донское, ул. 19 Съезда ВЛКСМ, 4 А

ВРЕМЯ РАБОТЫ:пн-пт 7:30 — 16:00
сб 7:30 — 13:00

ТЕЛЕФОН:(86546) 34-330
+7 (928) 363-81-25

АДРЕС:г. Новоалександровск, ул. Гагарина, 271 (пересечение с ул. Пушкина)

ВРЕМЯ РАБОТЫ:пн-пт 7:30 — 18:00
сб 7:30 — 13:00

ТЕЛЕФОН:8(86544) 5-46-44
+7 (928) 363-81-45

АДРЕС:с. Александровское, ул. Гагарина, 24

ВРЕМЯ РАБОТЫ:пн-пт 7:30 — 15:00
сб 7:30 — 13:00

ТЕЛЕФОН:(86557) 2-13-00
+7 (928) 363-81-35

АДРЕС:с. Кочубеевское, ул. Братская, 98 (ТЦ «ЦУМ»)

ВРЕМЯ РАБОТЫ:пн-пт 7:30 — 13:00
сб 7:30 — 13:00
вс 8:30 — 13:00

ТЕЛЕФОН:(86550) 500-22
+7 (928) 363-81-42

АДРЕС:г. Железноводск, ул. Ленина, 127

ВРЕМЯ РАБОТЫ:пн-пт 7:30 — 17.30
сб 7:30 — 13:00

ТЕЛЕФОН:(87932) 32-8-26
+7 (928) 363-81-30

АДРЕС:с. Арзгир, ул. Кирова, 21 (Рынок)

ВРЕМЯ РАБОТЫ:пн-пт 7:30 — 14:00
сб 7:30 — 13:00

ТЕЛЕФОН:(86560) 31-0-41
+7 (928) 363-81-44

АДРЕС:г.Ипатово, ул. Ленинградская, 54

ВРЕМЯ РАБОТЫ:пн-пт 7:30 — 18:00
сб 7:30 — 13:00

ТЕЛЕФОН:8 (86542) 5-85-15
8 (938) 347-42-16

АДРЕС:ст. Ессентукская, ул. Павлова, 17

ВРЕМЯ РАБОТЫ:пн-пт 7:30 — 16:00
сб 7:30 — 14:30

ТЕЛЕФОН:8 (87961) 6-61-00
8 (938) 347-42-18

АДРЕС:ст. Курская, ул. Калинина, д. 188

ВРЕМЯ РАБОТЫ:пн-пт 7:30 — 18:00
сб 7:30 — 13:00

ТЕЛЕФОН:8(87964) 5-40-10
8(938) 347-43-29

• Пятигорск
• Ставрополь
• Невинномысск

• Нефтекумск
• Буденновск
• Зеленокумск

• Минеральные Воды
• Ессентуки
• Георгиевск

• Благодарный
• Светлоград
• Донское

• Новоалександровск
• Александровское
• Кочубеевское

• Железноводск
• Арзгир
• Ипатово

• Ессентукская
• Курская

Где можно сдать тест на коронавирус

Диагностика с помощью ПЦР рекомендована таким категориям граждан:

• входящим в группу контактных лиц с больными коронавирусом;
• больным пневмонией;
• пожилым людям с хроническими недугами и ослабленным иммунитетом;
• пациентам с признаками простуды;
• уже излечившимся от вируса, чтобы подтвердить этот факт;
• гражданам, посещавшим места, представляющие потенциальную опасность.

Для этого нужно обратиться в медицинские учреждения государственной формы собственности Москвы и не только.

Сделать ПЦР-тест можно и платно в лабораториях Инвитро, которые расположены во многих городах России. Стоимость анализа невысокая.

Сферы применения метода

В процессе диагностики ПЦР очень помогает медикам. Через этот анализ получается практически безошибочно выявить конкретные вирусы и бактерии.

Метод успешно применяется в сферах:

• урологии;
• гематологии;
• фтизиатрии;
• гинекологии;
• пульмонологии;
• неонатологии.

При использовании диагностики можно определить, насколько действенно будет лекарство для конкретного пациента, вызовет ли препарат аллергию, побочные эффекты.

В других сферах жизни ПЦР-методика также применяется:

1. Криминалистика. Оставшиеся на месте преступления «следы» (кровь, волосы, сперма, слюна, др.) исследуют с помощью ПЦР. Полученные данные сравнивают с ДНК подозреваемого.
2. . ДНК родителя и ребёнка будут схожи при проведении ПЦР.
3. Клонирование генов. В результате его организм приобретает другие свойства.
4. Иные научные цели.

Анализ на стрептококковую инфекцию. Антистрептолизин-О (АСЛО)

то такое антистрептолизин О (АСЛО)? Антистрептолизин О (АСЛО) – это маркер стрептококковой инфекции в организме. При попадании в организм человека, стрептококк группы А начинает вырабатывать антиген (чужеродный для организма человека белок) – стрептолизин, а иммунная система, для защиты организма, начинает вырабатывать антитела к этому антигену – антистрептолизин О (АСЛО). Повышенный антистрептолизин О (АСЛО) говорит о перенесенной стрептококковой инфекции, о ревматическом заболевании, спровоцированном стрептококком, или риске ревматического заболевания. Обычно, по уровню АСЛО в крови можно определить, когда человек болел стрептококковой инфекцией: уровень антистрептолизина О увеличивается спустя 1 неделю после инфекции и достигает своего пикового значения через 4-5 недель. При хронической стрептококковой инфекции (чаще это хронический тонзиллит при неудовлетворительных результатах лечения) высокий уровень АСЛО может держаться месяцы и годы.

Что делать при обнаружении высокого антистрептолизина О:

1. Обратиться к ЛОР-врачу (оториноларингологу), т.к. в большинстве случаев источник стрептококковой инфекции – миндалины или аденоиды. Правильное лечение хронического тонзиллита и аденоидита в большинстве случаев решает проблему повышенного АСЛО и ревматического риска.
2. Получить консультацию врача ревматолога, возможно проверить органы-мишени ревматизма (сердце, почки, суставы, нервную систему).

Для чего нужен анализ на антистрептолизин О (АСЛО)? Анализ антистрептолизина О применяется для диагностики ревматологических заболеваний и их риска при стрептококковой инфекции. При лечении хронического тонзиллита от уровня АСЛО зависит тактика лечения. Уровень АСЛО в крови особенно важен для дифференциальной диагностики ревматизма и ревматоидного артрита (при истинном ревматизме антистрептолизин О повышается гораздо чаще и выше).

Где сдать анализ на антистрептолизин О (АСЛО)? В нашей клинике Вы можете сдать кровь на антистрептолизин О семь дней в неделю. Мы рекомендуем сдавать кровь утром натощак, а накануне, по возможности, избегать переедания.

Основные показания к анализу на антистрептолизин О (АСЛО):

• Обследование на ревматизм, ревматоидный артрит и другие ревматические заболевания, ревматическое поражение сердца – миокардит и почек – гломерулонефрит
• Хронический тонзиллит
• Любая стрептококковая инфекция (рожа, отит, скарлатина и т.д.)

Ключевые особенности СУОТ для малых предприятий

Рекомендуемая структура системы управления охраной труда приведена в Типовом положении о СУОТ, утверждённом приказом Минтруда РФ от 19.08.2016 №438Н. К слову, мы не раз его комментировали здесь и здесь. Но вот стоит ли слепо ориентироваться на предложенную структуру и составлять положения и процедуры для тех мероприятий по охране труда, которые не требуются для Вашей организации? Очевидно, нет. В таком случае наша задача — найти компромисс между требованиями законодательства и производственной реальностью.

В самом Типовом положении указывается, что:

Как мы видим, СУОТ для малых предприятий отличается от других глубиной проработки. Иными словами, полноценная (не упрощённая СУОТ) не будет неуместной для малых организаций. Вот только часть положений и процедур попросту не пригодится в деятельности Вашей организации. Стоит ли на них тратить свои силы и время?

Детекция ДНК-продуктов амплификации

В ходе детекции результатов ПЦР продукты, получившиеся в ходе амплификации, разделяются. Параллельно с этим к смеси добавляются вещества, наделяющие фрагменты ДНК способностью к яркому свечению, говорящему о наличии болезнетворных элементов в исследуемом материале.

Основные преимущества метода полимеразной цепной реакции

К основным преимуществам метода полимеразной цепной реакции можно отнести:

1. Возможность выявления того или иного возбудителя напрямую. Подавляющее большинство классических методов лабораторной диагностики позволяют определить вирусы и микробы исключительно по присущим им косвенным признакам. Так, например, ИФА-диагностика позволяет обнаружить в крови заболевших белки, образованные в ходе распада возбудителей болезней. Метод же ПЦР дает возможность увидеть специфический участок ДНК возбудителя.
2. Высокую специфичность. В ходе изучения образцов, забранных у пациента, выделяется присущий только тому или иному возбудителю уникальный фрагмент ДНК.
3. Высокую чувствительность. Выявление болезнетворных микроорганизмов возможно даже тогда, когда в человеческом организме присутствует всего один представитель своего вида.
4. Универсальность. На сегодняшний день реакция ПЦР может быть получена практически при любом биологическом материале – от мочи и до соскоба клеток эпителия.
5. Быстроту получения результата. Благодаря универсальности способа обработки предоставленного для анализа материала, распознаванию продуктов реакции, а также использованию современного оборудования произвести диагностику ПЦР ДНК можно всего за 5-6 часов.
6. Возможность определения самых разнообразных возбудителей. Метод ПЦР-диагностики настолько чувствителен, что дает возможность определить возбудителя не только у больного, страдающего заболеванием в острой стадии, но и при хронической форме заболевания.

Специфичность и применение

ПЦР, как метод молекулярной диагностики, хорошо зарекомендовал себя, проверен временем и тщательно апробирован. Метод ПЦР, в частности, позволяет определить наличие патогена даже в случае, если в пробе присутствует всего несколько молекул нуклеиновой кислоты (ДНК или РНК) диагностируемого возбудителя болезни. ПЦР позволяет выявлять и точно идентифицировать наличие патогенов, включая конкретные штаммы, не прибегая к трудоёмким и, порой, дорогостоящим микробиологическим методам и растениям-индикаторам, что сегодня особенно актуально. Чувствительность и специфичность метода значительно превосходит таковую у иммунохимических и микробиологических методов, а его ключевые принципы позволяют диагностировать наличие инфекций независимо от антигенной изменчивости патогенов.

Сегодня свой выбор в пользу диагностики методом ПЦР-анализа делают в первую очередь на основе того, что данный подход позволяет обнаруживать наличие возбудителей инфекционных заболеваний в тех случаях, когда другими методами (иммунологическими, бактериологическими, микроскопическими) это сделать невозможно. Особенно эффективен метод ПЦР для диагностики трудно культивируемых, некультивируемых и скрыто существующих форм микроорганизмов, с которыми часто приходится сталкиваться при латентных инфекциях.

Специфичность ПЦР основана на образовании комплементарных комплексов между матрицей и специально подобранными высокоспецифичными праймерами — короткими синтетическими олигонуклеотидами длиной 18 — 30 нуклеотидов. Каждый из подбираемых праймеров комплементарен одной из цепей двуцепочечной матрицы, фланкируя с 3’- и 5’-концов амплифицируемый фрагмент ДНК. В зависимости от того какие участки были выбраны для амплификпции (консервативные или вариабельные), можно идентифицировать патоген, как в пределах определенного вида или семейства, так и с точностью до конкретного штамма. Именно от правильности анализа последовательности нуклеотидов целевой ДНК или РНК и сделанного на его основе подбора праймеров зависит специфичность конкретной тест-системы.

В ходе ПЦР на первом этапе под действием высокой температуры (~94°С) происходит денатурация ДНК — разделение антипаралельных цепей двойной спирали. На втором этапе температуру понижают до уровня, при котором праймеры могут комплементарно взаимодействовать с участками геномной ДНК или кДНК (этап отжига праймеров). Если на этом этапе установить слишком низкую температуру, то праймеры будут отжигаться не только на строго специфичных местах и в результате мы получим множество неспецифических фрагментов разного размера. Если же температуру слишком завысить, то праймеры будут «сваливаться» со своего «родного» сайта связывания, в результате чего мы или вообще не получим продукта, или чувствительность тест-системы будет существенно снижена. Поэтому оптимизация температуры отжига в каждом конкретном случае очень важна. На третьем этапе, следующем после отжига праймеров, устанавливают температуру на уровне 64-72°С (значение конкретной температуры оптимизируется) — этот диапазон температур оптимален для используемых в ПЦР термостабильных ДНК-полимераз. На этом этапе и происходит достройка новой цепи ДНК, начиная с праймера (элонгация цепи). Точно воспроизводящийся программируемый цикл денатурация-отжиг-элонгация обеспечивается в специальных приборах — амплификаторах, повторяется 25-45 раз. Поскольку при каждом цикле количество фрагментов ДНК удваивается, то за 35 циклов от одной молекулы ДНК образуется около 1010, что и определяет высокую чувствительность метода, позволяющего достоверно определять присутствие всего 10-100 молекул целевой ДНК в анализируемом материале.

Где сдать анализ?

Где сдать ПЦР-анализ: в государственной поликлинике или в частной лаборатории? К сожалению, в муниципальных медицинских учреждениях аппаратура и методы нередко устаревшие. Поэтому лучше отдать предпочтение частным лабораториям с современным оборудованием и высококвалифицированными кадрами. Кроме того, в частной клинике вы получите результаты значительно быстрее.

В Москве многие частные лаборатории предлагают проведение анализа ПЦР на различные инфекции. Например, в таких клиниках, как «Вита», «Комплексная клиника», «Счастливая семья», «Уро-Про», проводят анализ ПЦР. Цена обследования составляет от 200 руб. за определение одного возбудителя.

Можно сделать вывод, что диагностика инфекционных заболеваний методом ПЦР в большинстве случаев является быстрым и достоверным способом обнаружения возбудителя в организме на ранних сроках инфицирования. Но все же в определенных случаях стоит выбрать другие способы диагностики. Определить необходимость проведения такого исследования может только специалист. Расшифровка анализа ПЦР также требует профессионального подхода. Следуйте рекомендациям врача и не сдавайте самостоятельно анализы, в которых нет необходимости.

ПЦР исследование на ВИЧ

ПЦР на ВИЧ следует выделить отдельным пунктом, так как тут существует специфический набор ограничений.

Во-первых, ПЦР на ВИЧ определяет не ДНК вируса иммунодефицита человека, а ДНК измененной вирусом клетки-лимфоцита. В нем будет храниться информация о вирусе и размножаться, создавая все больше пораженных лимфоцитов.

При исследовании ПЦР на ВИЧ вероятность ложноположительного результата составляет около 2%, если не было нарушений среди медицинского персонала (правильно маркированная пробирка, не перепутали пробирки местами, не было загрязнения материала при вскрытии пробирки).

Длительность ПЦР может составлять от 4 часов до 7 суток, в зависимости от организованности медицинского учреждения, где происходит диагностика инфекций.

Как расшифровать ПЦР анализ

Проведение ПЦР исследования позволяет не просто установить тип инфекции, присутствующий в организме больного, но и оценить его с количественной точки зрения (количество микробов). Расшифровка результатов количественного анализа ПЦР играет важную роль в обнаружении и проверке эффективности лечения большого числа хронических заболеваний, скажем гепатита C.

Результатом анализа ПЦР могут стать положительный и отрицательный ответы.

• Отрицательный результат. Следы инфекции не были выявлены в биологическом материале, который являлся объектом исследования в процессе анализа ПЦР. Как правило, на основании отрицательного результата можно полагать, что в организме действительно отсутствует инфекция.
• Положительный результат. Такой результат анализа ПЦР свидетельствует о том, что следы инфекционного заболевания присутствуют в биологическом материале пациента. Положительный результат анализа ПЦР характеризуется большой степенью точности.

Иногда инфицирование выявляется на фоне полного здоровья и отсутствия признаков заболевания. Некоторые больные считают, что анализ сделан неправильно, но реальная ситуация другая. Если ПЦР показала, что возбудитель в организме есть, значит, он там действительно находится. Просто инфекционные болезни никогда не начинаются сразу после заражения, имея инкубационный период различной продолжительности.Скрытый период может продолжаться очень долго, например, при СПИДе – несколько лет, пока какие-то механизмы не подтолкнут вирусы к размножению. Возбудитель определяется в организме носителей и тех, кто не долечился. Очень часто переходят в скрытую (латентную) форму различные ЗППП. В этом случае может понадобиться дополнительная лабораторная диагностика.

Что выявляет анализ

Оценка методом помогает обнаружить не только проявившиеся вирусы и инфекции у человека, но также скрытые, о которых пациент даже не подозревает.

В связи с этим всем людям, желающим стать в ближайшем времени родителями, рекомендуется выполнить анализ. В ходе исследования могут быть обнаружены разные виды папилломавируса человека, микоплазмы и уреаплазмы (уреалитикум и парвум), гарднереллы и кандиды, микобактерии туберкулеза (в разной форме заболевания), вирусы гепатита, хеликобактерная инфекция, ВИЧ, герпес и цитомегаловирус.

Все вышеуказанные вирусы и инфекции легко выявляются при сдаче анализа ПЦР. К примеру, вирус папилломы может спровоцировать при некоторых ситуациях (как вариант — сильно ослабленная иммунная система) появление на теле бородавок.

Вследствие того, что данный метод оценки является особо чувствительным к происходящим процессам в организме женщин и девушек, множество причин может оказать влияние на конечный итог. Из этого следует, что анализ ПЦР на ВИЧ не считается точным способом диагностирования. Лишь в 96-98% он показывает достоверный результат, а в остальном может указывать на неверную информацию.

Диагностика инфекционных болезней  во многих ситуациях считается легким способом выявления возбудителей на начальных этапах заражения.

По вопросу расшифровки данного анализа следует обратиться к профессионалу. Требуется соблюдать все врачебные советы.

Расшифровка результатов ПЦР

Расшифровка анализов ПЦР очень просто (см примерный бланк выше). Существует положительный и отрицательный результаты исследования. Положительный означает, что инфекция в организме есть, но это не должно наводить страх на пациента. Наоборот, это значит, что теперь можно начать лечение и вовремя остановить патоген. Отрицательный результат, соответственно, показывать отсутствие инфекции в организме.

Также не стоит забывать о ложноположительных/ложноотрицательных результатах. В медицине золотым стандартом является три одинаковых результата подряд в независимых клиниках. Стоит помнить, что в разных клиниках сама КДЛ (клинико-диагностическая лаборатория) может быть одна. То есть, здания и названия будут разные, но все анализы отправляются в одну лабораторию, связывающую эти клиники. Поэтому, получив результат в одной клинике, для того, чтобы удостовериться в правильности данного результата, стоит обратиться еще в две клиники и узнать, не сдают ли они результаты в одну и ту же КДЛ.

Словарь терминов:

Что такое амплификация ДНК?

Для того, чтобы осуществить амплификацию ДНК, используются ДНК-матрицы, представляющие собой молекулы ДНК инфекций, использующиеся с целью клонирования ДНК. В основе самой амплификации лежит присущий всем живым организмам процесс достраивания ДНК при помощи удвоения его единичной цепочки.

Именно поэтому, взяв единичный фрагмент ДНК, специалист, выявляющий заболевание методом полимеразной цепной реакции, способен скопировать его и увеличить до требуемого числа копий в режиме цепной реакции. Так, например, первый цикл копирования образует 2 фрагмента, второй – 4, а третий уже, соответственно, 8.

Причем цикл длится считанные минуты и позволяет изменить температуру в микроскопическом химическом реакторе, содержащем все требуемые для воссоздания компоненты. В ходе присоединения искусственно созданных участков ДНК, ничем не отличающихся от ДНК вирусов и бактерий, создаются две короткие спирали, позволяющие воспроизвести будущую ДНК и включающие в свой состав 2 цепи участков ДНК.

В процессе амплификации применяется специфический участок ДНК-полимеразы и давший название тесту ПЦР, о котором идет речь в данной статье. Полимераза выступает в качестве катализатора реакции и обеспечивает прикрепление нуклеотидных оснований к увеличивающейся цепи ДНК, носящее последовательный характер. Это означает, что процесс амплификации ДНК является неоднократным возрастанием числа копий ДНК, присущих тому или иному микроорганизму.

Именно поэтому необходимость достраивания всей цепи ДНК для того, чтобы выявить возбудителя, отсутствует. Необходим лишь участок, присущий тому или иному микроорганизму. Производится анализ ПЦР на скрытые инфекции на специально программируемом оборудовании, а именно на амплификаторе или на ПЦР-термостате. Причем в зависимости от разновидности выявляемой инфекции данный процесс занимает не более 2-3 часов.

Суть полимеразной реакции

Любой микроорганизм и вирус содержат в своей структуре молекулы ДНК или РНК. У каждого из них эти соединения уникальны, поэтому, если выделить в анализе крови у детей или взрослых нуклеиновые кислоты, можно с абсолютной точностью поставить диагноз.

К сожалению, концентрация ДНК в образцах крови или других биологических материалах достаточно низка и с помощью обычных методов диагностики определить ее не получается. Чтобы справиться с этой проблемой, была изобретена полимеразная цепная реакция.

Сущность ПЦР заключается в специальной обработке образца крови, в результате чего в ней увеличивается концентрация ДНК молекул, определение типа которых в дальнейшем позволяет установить вид возбудителя и поставить диагноз.

Подготовка материала – выделение РНК.

Принцип выделения для всех нуклеиновых кислот один и тот же – лизис биоматериала, осаждение нуклеиновых кислот на субстрат, очистка от белков, жиров, углеводов, солей и клеточного дебриса, и элюция нуклеиновых кислот в раствор.РНК является намного более лабильной молекулой, чем ДНК. Процесс деградации рибонуклеиновых кислот происходит на порядок быстрее. Этому способствует, во первых, их одноцепочечная структура, во вторых – большое количество РНКаз (ферментов, расщепляющих РНК), которые присутствуют как и в самих клетках, из которых производят выделение, так и на поверхности кожи оператора (и всех предметов и оборудования, с которыми он контактировал). Тем более, во многих протоколах выделения ДНК применяется дополнительная обработка образца РНКазами – появляется еще один источник контаминации рабочего места.Рассмотрев эти особенности, можно выделить ряд обязательных для соблюдения правил подготовки образцов РНК:

• Для уменьшения деградации от эндогенных РНКаз забор биоматериала должен быть проведен непосредственно перед выделением, биоматериал должен быть заморожен в жидком азоте. (Дляразных наборов реактивов условия могут быть разными. Более подробные рекомендации описаны в протоколах выделения.)
• Работать исключительно в перчатках и масках. Перчатки, посуду, оборудование и все рабочие поверхности следует обработать деактиватором РНКаз (чаще всего раствором ДЕПК).
• Использовать воду, свободную от РНКаз (RNAse free).
• Не допускать хранения образцов РНК и реактивов для их выделения рядом с растворами РНКаз.

Цена на проведение процедуры

Стоимость ПЦР определяется тем, какую инфекцию будут исследовать. Также она зависит от методики проводимого тестирования. Средняя цена анализа находится в пределах от 200 до 850 руб. В стоимость входит и плата за забор материала — около 400 руб.

Ориентировочные цены на исследование ПЦР.

Исследуемая инфекция	Цена, руб
ВПЧ	360-1920
Хламидия	800
Краснуха	830
Микоплазма хоминис	560
Кандида	590
Микоплазма гениталиум	370
Герпес	360-610
Гонококк	370
Уреплазма	360

Зачастую медицинские учреждения предлагают провести анализ одновременно на несколько инфекций, чтобы выявить нужную. Такое обследование будет стоить дороже, но оно избавит от необходимости дополнительных исследований, что сэкономит время пациента.

Динамический диапазон

 Для того, чтобы точно оценить эффективность реакции, необходимо провести, как минимум, 3 повторения реакции при концентрации ДНК-матрицы 5 log (105 копий ДНК-матрицы на образец). Причина такой необходимости проиллюстрирована на рисунке 6. На нем отображено изменение угла наклона графика зависимости величины C_T при различных градиентах разведения ДНК-матрицы (1 log и 5 log). То есть, если мы будем проводить тестирование серии разведений при концентрации 1 log, и получим показатель 100% эффективности реакции, в реальности, разброс данного показателя будет находится в диапазоне 70-170%. Делая тот же самый тест при концентрации ДНК-матрицы 5 log, потенциальный разброс будет составлять всего ± 8%. То есть, если мы получили значение, например, 94% эффективности (при концентрации 5 log), то действительная эффективность реакции будет в диапазоне 88-100%. Из этого можно сделать вывод, что определять эффективность реакции необходимо при концентрации ДНК-матрицы 5 log. Уклон графика -3,3 ± 10% свидетельствует о 100%  ± 10% эффективности полимеразной цепной реакции. Более низкие значения эффективности ПЦР свидетельствуют о низкой чувствительности метода при данных условиях.

Рисунок 6.

На Рисунке 6 точный расчет эффективности реакции, сделанный на основе серии разведений ДНК-матрицы. Для двукратного разведения на 5 точках (оранжевый) потенциальный разброс значений выше, чем для десятикратного разведения на 5 точках (синий).