Серологический метод

Преимущества и недостатки

Серологический метод лабораторной диагностики имеет большое количество плюсов, что глубоко внедрило его в практическое использование во всех отраслях медицины: гинекологию, урологию, инфектологию и венерологию.

Серодиагностика является общедоступным анализом, позволяющим быстро получить точные результаты. Она не требует длительной подготовки к забору материала и легко переносится всеми пациентами. Для забора венозной крови от пациента требуется соблюдать диету лишь в течение 48 часов. Серологические реакции также обладают высокой специфичностью (100%), чувствительностью (95%) и точностью (90-95%).

Но этот анализ венозной крови требует больших затрат дорогих диагностикумов, что влияет и на его себестоимость. Некоторые возбудители обладают слабой иммуногенностью, то есть в организме к ним вырабатывается мало антител, поэтому проведение серодиагностики невозможно. Кроме того, метод значительно реже используется при вирусных инфекционных патологиях, уступая по эффективности ПЦР-анализу.

Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР)

Методы серологических исследований

Способов проведения диагностики множество, как и заболеваний, которые они выявляют. Наиболее значимые:

1. Агглютинация.
2. Преципитация
3. Гемагглютинация.
4. Торможение гемагглютинации.
5. Непрямая реакция Кумбса.
6. Коагглютинация.
7. Преципитация.
8. Двойная радиальная иммунодиффузия.
9. Реакция связывания комплемента (РСК).
10. Иммунофлюоресценция (РИФ).
11. Иммуноферментный метод (ИФА).
12. Нейтрализация.

Чаще всего в лабораториях применяют ИФА, РИФ, РСК, реакции агглютинации.

Иммунофлюоресцентный метод (РИФ)

Для проведения исследования необходим биологический материал пациента, люминесцирующая жидкость. Второй компонент содержит антитела к предполагаемому возбудителю заболевания, которые помечены флуоресцеинизотиоционатом.

Виды РИФ:

1. Прямой – материал пациента смешивают с мечеными антителами, если это срез ткани, обрабатывают его поверхность. Если возбудитель присутствует, образуется светящийся комплекс.
2. Непрямой – проводят в 2 этапа. На первом в сыворотку или другой материал добавляют немеченые (первые) антитела. На втором вводят меченые (вторые) антитела против первых.

Полученные комплексы исследуют под люминесцентным, оптическим микроскопом ручным способом или автоматическим с помощью микрочипового цитометра. Из-за флуоресцентного вещества комплексы при затемнении излучают зеленое свечение, яркость которого отмечают плюсами от 1 до 4. Чем меньше плюсов, тем меньше комплексов с возбудителем заболевания.

Иммуноферментный метод

Как и РИФ, основан на маркировке чужеродного материала или белковых иммунных компонентов. В качестве маркировочного вещества выступают различные ферменты, которые имеют высокую специфичность, умеренную каталитическую активность, стабильность при образовании комплексов. Методы ИФА: гомогенные, гетерогенные. При первых все реакции происходят в жидком растворе. При вторых реакции проводят при участии твердого носителя.

Суть ИФА заключается в образовании комплексов иммунных белков человека с чужеродными антигенами сначала в жидком растворе, затем на твердой фазе. Под ней подразумевают прикрепление антигенов, антител к стенкам лунок полистиролового микропланшета. То есть после смешивания материала пациента с антителами против возбудителя смесь переносят на поверхность с лунками, куда прикрепляются антитела, антигены. Дальше изучают состав материала.

Реакция связывания комплимента

Для исследования необходимы: кровь или другой материал пациента, сыворотка с антителами, комплимент. Сначала смешивают кровь с сывороткой – образуется комплекс. После добавляют комплимент, который связывается с комплексом. Если связи между антиген-антитело не образуется, то комплемент остается в свободном, несвязанном состоянии. Чтобы определить его состояние в исследуемой жидкости, добавляют гемолитическую смесь (эритроциты барана с гемолитической сывороткой). Если комплемент свободен, он соединяется с гемолитической смесью – реакция отрицательная, возбудитель не обнаружен.

Реакции, связанные с агглютинацией

Самые простые серологические реакции – с применением антибактериальной сыворотки. Исследуемую кровь пациента смешивают при комнатной температуре с различными сыворотками определенной концентрации. Результат оценивают по концентрации сыворотки, при которой произошла агглютинация. С помощью агглютинации определяют группу крови, резус-факторы.

Важно! 

Распространенным методом серологической диагностики являются реакции, основанные на феномене преципитации: иммуноэлектрофорез, иммунодиффузия и др.

Показания к проведению серологического анализа

Серологические анализы крови назначают для диагностики различных инфекций:

• вирусные — корь, ЦМВ, гепатит В и С и другие;
• бактериальные — например, боррелиоз или брюшной тиф;
• паразитарные — например, токсоплазмоз или токсокароз.

Чаще всего серология применяется для выявления вирусных инфекций, потому что выделить вирусы из организма напрямую очень сложно. Прямые методы используются только в вирусологии с научными целями, а для бытовой диагностики не применяются.

При менингитах используют серологический анализ ликвора, спинномозговой жидкости. Если менингит вызван бактериями или вирусами, в ликворе появятся антитела к этим возбудителям.

Комплексы серологических реакций показаны не только при наличии явных клинических признаков болезни. Обследование применяют для выявления носителей различных инфекций. Например, при трудоустройстве нужно сдавать:

• серологическое исследование крови на брюшной тиф;
• тесты для определения маркеров вирусных гепатитов;
• анализ крови на сифилис.

Эти обследования показаны не для всех профессий, а для так называемых декретированных групп. Сюда входят медицинские работники, педагоги, работники торговли и пищевой промышленности.

Серологические тесты используют для оценки напряженности иммунитета к различным инфекциям у переболевших или привитых людей. Если уровень антител после вакцинации снижается менее определенного значения, прививку нужно повторять.

Прямые и непрямые методы дагностики сифилиса

Прямые тесты — это методы непосредственного выявления возбудителя в материале из очагов поражения. Прямые методы диагностики позволяют установить окончательный диагноз сифилитической инфекции, т.к. основаны на обнаружении T. pallidum в биологических образцах. Исследования проводятся с помощью темнопольной микроскопии и молекулярно-биологических методов (прежде всего ПЦР). Эти методы используются при наличии видимых сифилитических поражений. 

Прямые методы используются для диагностики ранних форм заболевания, первичного и вторичного сифилиса с клиническими появлениями (эрозивно-язвенными элементами); для подтверждения врожденного сифилиса (для анализа используют ткань пуповины, плаценты, органы плода, отделяемое слизистой оболочки носа, содержимое пузырей, отделяемое с поверхности папул).

Прямые методы:

• микроскопия в темном поле (темнопольная микроскопия, ТПМ; dark field microscopy, DFM) и другие методы микроскопии;
• метод прямой иммунофлюоресценции (ПИФ; direct immunofluorescent assay, DFA)
• молекулярно-биологические методы детекции ДНК бледной трепонемы (полимеразная цепная реакция, ПЦР; polymerase chain reaction, PCR) и другие тесты на амплификацию нуклеиновых кислот (МАНК; nucleic acid amplification test, NAAT)
• ДНК-зондирование или гибридизация нуклеиновых кислот (ГНК) ; 
• заражение кроликов инфицированным материалом от больных (rabbit infectivity test-RIT). Этот метод является старейшим, но в силу экономических, организационных трудностей, длительности в практике медицинских учреждений не используется. 

Серологические (непрямые) методы дают возможность выявлять в крови больных или антитела, специфичные для определенного возбудителя инфекционного заболевания, или антигены (в  большинстве случаев — белки) самих микроорганизмов. В основе всех серологических реакций лежит взаимодействие антигена и антитела. Методы серологической диагностики сифилиса базируются на выявлении антител к возбудителю сифилиса в сыворотке крови или в спинномозговой жидкости.  

Серологические методы очень важны при диагностике сифилиса из-за того, что возбудитель сифилиса не культивируется на питательных средах in vitro, практически незаметен в «светлом поле» микроскопа, не окрашивается практически никакими стандартными лабораторными красителями и плохо сохраняется вне организма больного. Кроме того, в последние годы довольно часто наблюдается скрытое течение сифилитической инфекции, что затрудняет получение биологического материала, пригодного для прямой идентификации T. pallidum. 

Контроль после лечения больных нейросифилисом

Больные нейросифилисом, независимо от стадии, должны находиться под наблюдением в течение 3 лет, с исследованием ликвора. Результаты лечения контролируются с помощью серологических исследований сыворотки крови в сроки, указанные выше, c обязательным ликворологическим обследованием в динамике. Первый ликворологический контроль следует провести через 6 месяцев после лечения и при отсутствии санации ликвора по уровню цитоза и серологическим показателям необходимо назначить еще один курс лечения (лечение антибиотиками проводят при сохранении патологии в ликворе). 

Уровень белка в ликворе нормализуется достаточно медленно, и иногда требуется до 2 лет для его нормализации. Сохранение повышенного , но имеющего тенденцию к снижению, уровня белка при нормальных показателях цитоза и отрицательных серологических тестах — показание для проведения дополнительного курса лечения.

Дальнейший контроль состояния спинномозговой жидкости проводится 1 раз в 6 месяцев в пределах 3 лет наблюдения после установления диагноза. Стойкая нормализация ликвора, даже при сохранении резидуального клинического дефекта, является показанием к снятию с учета.

Лица с серорезистентностью ( с сохраняющейся позитивностью нетрепонемных тестов) находятся на клинико-серологическом контроле в течение 3 лет.

Трепонемные и нетрепонемные тесты

1. Нетрепонемные тесты служат для выявления антител к нетрепонемным антигенам. 

Распространенные нетрепонемные тесты — это липидные (реагиновые) реакции. Эти тесты связаны не с определением антител против трепонемы, но с определением антител IgM и IgG к липоидным материалам из разрушенных клеток организма больного сифилисом. Чаще всего эти тесты применяются для скрининга из-за простоты и дешевизны. В них используется нетрепонемный кардиолипиновый антиген, а сами тесты проводятся в разных вариантах: 

      1) флокуляционные тесты (продукт реакции выпадает в виде хлопьев): микрореакции на стекле с липидными антигенами —экспресс-метод диагностики (микрореакции преципитации — РМП), VDRL (Venereal Disease Research Laboratory test), RPR  (Rapid Plasma Reagin test) и др.; 

      2) реакция связывания комплемента (РСК) с липидными антигенами — реакция Вассермана (РСКк); 

      3) осадочные реакции, которые не используются в настоящее время (реакция преципитации Кана, цитохолевая реакция Закса — Витебского и др.). 

2. Трепонемные тесты — выявление антител к трепонемным антигенам. 

В трепонемных тестах чаще всего используются антигены Treponema pallidum, нативные (штамм Никольса) или рекомбинантные. Тест, в котором используются живые спирохеты — реакция иммобилизации бледных трепонем (РИТ), в настоящее время выводится из клинической практики из-за дороговизны и сложности.

Групповые антигены являются общими для двух или более видов микробов, входящих в один род, а иногда относящихся и к разным родам. Специфические антигены имеются только у данного вида микроба или даже только у определенного типа либо подтипа внутри вида. Определение специфических антигенов позволяет дифференцировать микробы внутри рода, вида, подвида и даже типа (подтипа). 

Групповые трепонемные реакции определяют антитела к групповым трепонемным антигенам: 

     1) РСК с протеиновым антигеном Рейтера; 

     2) реакция иммунофлюоресценции (РИФ); 

     3) реакция иммунного прилипания (РИП). 

Видоспецифичные протеиновые трепонемные реакции определяют антитела к специфическим видовым антигенам Treponema pallidum: 

    1) реакция иммобилизации бледных трепонем (РИТ или РИБТ); 

    2) РСК с кардиолипиновым антигеном и с трепонемным ультраозвученным антигеном (РСКт).

    3) РИФ-Абс. и ее варианты (IgM-FTA-ABS, 19S-IgM-FTA-ABS, и др.); 

    4) реакция непрямой гемагглютинации бледных трепонем (РПГА) или агглютинации латексных частиц; 

    5) иммуноферментный анализ (ИФА);

    6) иммуноблоттинг (Вестерн-блот и лайн-блот).

В связи с наличием длительных латентных периодов заболевания и неспецифическим характером нетрепонемных тестов,  при проведении скрининговых исследований все чаще используются тесты, основанные на определении специфических антител против трепонемы в пробах крови. 

Гистоморфологические методы.

В исследовательских целях, при сифилитических поражениях, проводятся микроскопические исследования образцов пораженных тканей (твердого шанкра, сифилидов). В настоящее время, для диагностики сифилиса гистологические исследования используются редко, т.к. дифференциальная диагностика гистологических изменений представляет серьезные трудности. При трактовке гистоморфологических изменений в каждом конкретном случае необходимо обязательно учитывать клинические и лабораторные данные.

Расшифровка результатов

Результаты анализов расшифровывают от 2 до 24 часов. При обнаружении в материале пациента антигенов возбудителя – результат положительный, если при добавлении в кровь антител против определенного возбудителя не образуется комплекс антитело-антиген – результат отрицательный. После выявления чужеродного белка определяют количество антител, которые связались с антигенами, чтобы определить течение, тяжесть заболевания, в бланках анализа это отмечают плюсами от 1 до 4.

При диагностике возможны ложные результаты, если исследование проведено в период «серологического окна» заболевания или нарушены правила подготовки к сдаче, выполнения исследования. При положительном результате назначают повторный анализ. При подозрении на сифилис, ВИЧ, гепатит положительный результат можно получить не меньше чем через 2 недели после контакта с инфицированным.

После постановки диагноза, назначении лечения через 2-3 недели снова берут анализ, чтобы определить титр (количество) антител. Если он нарастает –  заболевание прогрессирует, количество возбудителей в организме повышается, терапия требует коррекции. Серологическая диагностика при аллергических реакциях направлена на определение иммуноглобулинов Е, которые будут прикреплены к форменных элементам в анализе крови.

Важно! 

Параллельно с серологической диагностикой туберкулеза, бруцеллеза, туляремии проводят кожно-аллергические пробы.

Какие инфекции помогает выявить серологическое исследование.

Реакция флюоресценции

Что представляют собой способы обнаружения трепонемы

После того, как доктор соберёт анамнез больного и проведёт первичный осмотр ротовой полости, половых органов, кожных и слизистых покровов, у него появляется базовая информация по поводу состояния обратившегося к нему пациента, однако этого недостаточно для постановки точного диагноза.

Среди методик обнаружения наличия бледной трепонемы в организме – темнопольная микроскопия, метод полимеразной цепной реакции, а также прямой реакции иммунофлюоресценции.

Микроскопические исследования, или темнопольная микроскопия. Для выявления микроорганизмов во взятом материале, его микроскопия проводится в тёмном поле. Использование этого метода объясняется тем фактом, что некоторые бактерии плохо поддаются окрашиванию или вовсе не окрашиваются специальными красителями. К тому же, изучение материала в тёмном поле даёт возможность изучить состояние живых бактерий, а так как темнопольная микроскопия не требует окрашивания, она отличается более низкой стоимостью и занимает меньше времени для проведения.

Для анализа отбирается содержимое кожных сифилитических образований – язв, папул, эрозий, в некоторых случаях – материал из периферических лимфоузлов.

Что может показать такой анализ? Обнаружение в биологическом материале движущихся бледных трепонем в любом количестве является доказательством наличия у обследуемого сифилиса. Отличить бледную трепонему от других, непатогенных спирохет, можно по количеству завитков.

Следует отметить, что такой метод является единственным объективным способом определить диагноз “сифилис”, если речь идёт о ранних, свежих, первичных формах, когда серологические анализы дают негативные результаты. Особенно ценны его показания при диагностировании нейросифилиса и состояния реинфекции.

Как производится забор материала? Эрозия или папула сначала обрабатываются антисептическим средством – так место отбора жидкости готовится к вмешательству медика. После этого на её поверхность производится надавливание тупым скальпелем – таким образом медик добивается выделения тканевого сока прозрачного жёлтого цвета. Кроме того, может осуществляться соскоб или взятие мазка со слизистых. Срок годности полученного материала достаточно мал, поэтому анализ должен осуществляться сразу после его забора.

По результатам исследования у больного можно диагностировать первичный или вторичный сифилис, а также ранний врождённый сифилис у ребёнка.

Положительные результаты рассматриваются как достоверное основание для определения заболевания. Если у человека не выявлены трепонемы, процедуру повторяют до трёх раз, до этого применяя к ране компрессы с физиологическим раствором.

Если есть подозрение на третичный сифилис, или сочетание сифилиса с онкологическими новообразованиями, темнопольное микроскопирование сочетается с окрашиванием по методу Романовского-Гимзе, или серебрением по Морозову.

Метод ПИФ. Отличается большей безопасностью для проводящего его персонала, чем темнопольное исследование. Трепонемы в мазках при этом зафиксированы, они не обязательно должны быть живыми, поэтому осуществлять такое обследование можно в любое время после отбора материала.

Для изучения у больного отбирается содержимое жидкости, отделяемой сифилидами, или тканевые срезы с областей кожных проявлений сифилиса, лимфатических узлов. Чувствительность метода составляет до 95%.

Метод ПЦР. С помощью полимеразной цепной реакции, результат обследования можно получить уже через несколько часов после забора материала. Его чувствительность достигает 98,6%.

Однако, несмотря на кажущиеся преимущества, методика практически не используется в России и Украине, так как его чувствительно и специфичность недостаточно хорошо изучена в сравнении с прямыми методами диагностики. ПЦР-скрининг используют как дополнительный способ диагностирования врождённого сифилиса, нейросифилиса, а также при затруднении диагностики сифилиса у ВИЧ-больных.

Изучение сыворотки крови таким способом неэффективно, для ПЦР отбирают содержимое сифилидов.

Процесс сдачи анализа

Забор венозной крови на серологическое исследование осуществляется в первой половине дня. Пациенту следует заблаговременно приехать в лабораторию, взяв с собой необходимые документы (паспорт и направление на анализ).

Пациенту предлагают пройти в процедурный кабинет и удобно расположиться на кресле. Взятие крови осуществляют из вены, которая находится в области локтевого сгиба, поэтому необходимо освободить предплечье и локтевую зону от вещей. На плечо накладывается жгут, а под руку подкладывают подушку. Медицинская сестра надевает одноразовые стерильные перчатки и обрабатывает место пункции ватным тампоном, смоченным в дезинфицирующем средстве.

Алгоритм проведения венозной инъекции включает в себя нагнетание крови в вену, для этого пациента просят несколько раз сжать и разжать кулак. Сосуд при этом лучше визуализируется и прощупывается, что облегчает забор материала. Затем медсестра вводит иглу шприца в вену, берет 10 миллилитров крови и наклеивает на место инъекции бактерицидный пластырь. Чтобы избежать образование гематомы, после манипуляции следует согнуть руку в локте на 15-20 минут.

Серологическое исследование на гепатит, ВИЧ, сифилис: особенности

Сифилис. При проведении анализа на сифилис специалисты ищут белки, отвечающие за поступление в человеческий организм возбудителя инфекции — речь идет о трепонеме бледной. В качестве биологического материала в этом случае выступает сыворотка крови.

Гепатиты. Вирусные гепатиты — серьезные инфекционные заболевания, опасность которых заключается в том, что они достаточно долгое время могут жить в организме, никак себя не проявляя. Выявить заболевание в ранней фазе, когда оно лучше поддается лечению, можно проведя анализ на маркеры — маркеры появляются в крови после перенесенного заболевания или введения вакцины.

Нужно понимать, что выявление возбудителя возможно только через 1,5-2 месяца после инфицирования. Если анализ сдает беременная женщина, возможен ложноположительный результат.

Рекомендуем к просмотру медицинский сайт https://tabletix.ru/. На сайте найдете полезную информацию, врачебные мнения.Если вы наблюдаете один или несколько из симптомов, указанных ниже, стоит задуматься о сдаче серологического анализа:

• рвота;
• плохой аппетит или его отсутствие;
• беспричинное бессилие организма, переутомление;
• желтоватый цвет лица;
• изменения цвета кала и мочи.

ВИЧ. Если анализ на ВИЧ показал положительный результат, это не говорит о том, что пациент инфицирован СПИДом. Если заражение произошло недавно (не более двух месяцев назад), наличие антител не позволяет определить факт развития заболевания. Назначается повторное исследование.

Серологический анализ крови — важнейший метод исследования, основное назначение которого заключается в оперативном выявлении вирусов, инфекций, микробов в организме.

Этот уникальный лабораторный «инструмент» позволяет определить любое заболевание, которое является следствием угнетения иммунитета, поэтому не ленитесь, а регулярно сдавайте анализ, чтобы иметь возможность вовремя выявить болезнь и быстро от нее избавиться.

Подготовка к исследованию

Чаще биологическим материалом служит кровь, реже слюна, кал, моча, срезы тканей, альвеолярные смывы, спинномозговая, амниотическая жидкости. Серологические исследования включают в себя множество методов выявления возбудителей, от этого зависят определенные правила подготовки. Общие рекомендации перед серологическими тестами:

• последний прием пищи за 9-12 часов;
• за 24 часа ограничить употребление жирной, жареной, соленой, острой пищи, алкогольных напитков;
• в день сдачи крови нельзя есть, разрешено пить обычную негазированную воду;
• по возможности не курить за 10 часов до сдачи;
• прекратить прием любых лекарственных препаратов, в том числе витаминов. Если медикаменты назначены на постоянной основе и прекратить прием нельзя, предупредить врача;
• за 24 часа избегать стресса, исключить физические нагрузки.

Желательно, чтобы перед сдачей человек находился в спокойном состоянии, так как при любых эмоциональных проявлениях в кровь выделяются гормональные вещества, белки (кортизол, адреналин, норадреналин и др.). Если назначены инструментальные методы диагностики, то в первую очередь сдают кровь, чтобы последующие обследования не повлияли на результат анализа.

Расшифровка результатов: ложные, ошибочные, ложноположительные, ложноотрицательные

Почему при появлении первых же признаков и симптомов сифилиса следует сразу обратиться к доктору? Дело в том, что даже если самостоятельно сдать анализы в ближайшей лаборатории, правильно расшифровать их показатели может только квалифицированный венеролог.

Любые типы серологических тестов назначаются обычно как экспресс-диагностика, или при прохождении медосмотров. Их результаты могут быть отрицательными, слабоположительными, если концентрация антител не достигает определённого уровня, или положительными. Кроме того, каждый тип анализа может быть ложноположительным или ложноотрицательным. Положительные реакции нетрепонемных тестов обычно проверяются результатами специфических трепонемных.

Трепонемные серологические обследования также могут быть отрицательными, сомнительными, слабоположительными или положительными. Например, иммуноблоттинг назначается с целью подтвердить или опровергнуть результаты первичного обследования. Выявление антител типа IgG и IgM в крови отмечается полосками.

Если и неспецифический первичный скрининг, и специфическая серологическая реакция показывает отрицательный результат, значит, человек здоров, либо заражение произошло менее 10 дней назад.

Положительная реакция у беременных также может присутствовать при нетрепонемном скрининге, однако если далее был проведён иммуноблоттинг-тест, и он дал отрицательный результат, это означает отсутствие заболевания.

Может ли ошибка закрасться в результаты теста? Всегда существует некоторая вероятность, что анализ показал ошибочные результаты

Поэтому в процессе диагностирования доктор должен обращать внимание и на внешние факторы, которые не зависят от пациента

Ложноположительные тесты могут появляться, если у человека присутствует:

• сахарный диабет;
• алкогольное или наркотическое опьянение;
• корь, мононуклеоз, гепатит;
• болезни сердца;
• опухоль любого типа;
• беременность;
• аутоиммунное заболевание.

Большинство типов тестов могут выявить присутствие болезни, но только если она достигла определённой стадии развития. Например, RW покажет наличие заражения со 100-процентной вероятностью, но только спустя месяц после попадания возбудителя в организм. Третичный сифилис отображается в результатах RW с вероятностью до 75%.

Ранние стадии более целесообразно диагностировать посредством осуществления ИФА-тестов. Если у человека отсутствуют другие заболевания, его достоверность стремится к 96%.

Отрицательный показатель может свидетельствовать об отсутствии заболевания. Сомнительный результат – причина для назначения повторного обследования. Если у пациента обнаружены антитела к сифилису, это не повод для паники – квалифицированное и вовремя подобранное лечение может справиться с болезнью, если она присутствует, без каких-либо опасных последствий.

Антигены и антитела. Серологические реакции между антигенами и антителами.

Антигены – генетически чужеродные вещества, которые при введении в организм животного или человека вызывают специфический иммунный ответ — синтез антител, формирование сенсибилизированных Т-лимфоцитов, иммунологической  памяти или толерантности. Под чужеродными веществами понимаются химические структуры, которых нет в организме. Инородными для организма человека являются вирусы, микроорганизмы, а также клетки, ткани, органы животных и других людей. Антигены имеют несколько рецепторов для связи с антителами и способны вступать в реакцию с ними как в организме животного или человека (in vivo), так и вне организма – в пробирке (in vitro).

Антитела — высокомолекулярные белки глобулиновой фракции сыворотки крови. Антитела синтезируются под влиянием антигена и способны специфично реагировать (соединяться) с соответствующим антигеном. Все антитела имеют характерную структуру иммуноглобулинов; отличаются по иммунологическим, биологическим и физическим свойствам; и делятся на 5 классов – ІgG , ІgА, ІgМ, ІgD и ІgЕ. 

Серологические методы исследования

В лабораторной практике серологическое исследование крови является дополнительным к бактериологическому исследованию. Основные методы представлены:

1. Реакцией флюоресценции, которая проводится в два этапа. Сначала выявляются антитела в циркулирующем комплексе антиген. Затем на контрольный образец наносится антисыворотка, с последующим инкубированием препаратов. РИФ применяется для быстрого обнаружения возбудителя заболевания в исследуемом материале. Результаты реакций оцениваются с помощью люминесцентного микроскопа. Оценивается характер свечения, форма, размер объектов.

2. Реакцией агглютинации, которая представляет собой простую реакцию склеивания дискретных антигенов при помощи антител. Выделяют:

— прямые реакции, использующиеся для обнаружения антител в сыворотке крови больного. Определенное количество убитых микробов добавляется к сыворотке и вызывает образование осадка в виде хлопьев. Серологические исследования на брюшной тиф подразумевают проведение именно прямой реакции агглютинации;

— реакции пассивной гемагглютонации, основанные на возможности эритроцитов адсорбировать антиген на своей поверхности и вызывать склеивание при его контакте с антителом, и выпадение видимого осадка. Применяется в процессе диагностики инфекционных заболеваний для выявления повышенной чувствительности к определенным препаратам. При оценивании результатов учитывается внешний вид осадка. Осадок в виде кольца на дне пробирки свидетельствует об отрицательной реакции. Кружевной осадок с неровными краями говорит о наличии той или иной инфекции.

3. Иммуноферментным анализом, в основе которого лежит принцип присоединения ферментной метки к антителам. Это позволяет увидеть результат реакции по появлению ферментной активности или по изменению ее уровня. Этот метод исследования имеет ряд преимуществ:

— используемые реагенты — универсальны, и они стабильны на протяжении полугода;

— процесс учета результатов анализа автоматизирован.

Выше перечисленные серологические методы исследования имеют некоторые преимущества перед бактериологическим методом. Эти методы позволяют определить антигены возбудителей за несколько минут или часов. Более того, эти исследования могут выявлять антигены возбудителя даже после проведения лечения и гибели бактерий, вызывающих его.